續斷飲片 續斷飲片、水煎劑、配方顆粒HPLC指紋圖譜比照研讨

[2019年08月13日 11:44] 來源: 中國中醫藥信息雜志 編輯:小編 點擊量:0
導讀:高樂範帥帥王鑫國田偉陳鐘牛麗穎摘要:意圖樹立并比較續斷飲片、水煎劑、配方顆粒的HPLC指紋圖譜。辦法選用WondasilC18色譜柱(4.6mm×250mm,5?m),以乙腈-0.1%磷酸溶液為活動相進行梯度洗脫,流速1.0mL/min,檢測波長212nm,柱溫30℃。成果别離樹立了12批續斷飲片、水煎劑、配方顆粒的指紋圖譜。12批續斷配方顆粒HPLC指

高樂 範帥帥 王鑫國 田偉 陳鐘 牛麗穎

摘要:意圖 樹立并比較續斷飲片、水煎劑、配方顆粒的HPLC指紋圖譜。辦法 選用Wondasil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 ?m),以乙腈-0.1%磷酸溶液為活動相進行梯度洗脫,流速1.0 mL/min,檢測波長212 nm,柱溫30 ℃。成果 别離樹立了12批續斷飲片、水煎劑、配方顆粒的指紋圖譜。12批續斷配方顆粒HPLC指紋圖譜的14個共有峰均能在水煎劑中得到追尋,有13個共有峰可在飲片中得到追尋,并指認出川續斷皂苷Ⅵ、綠原酸2個成分。定論 樹立的HPLC指紋圖譜辦法重複性好、安穩。續斷飲片、水煎劑、配方顆粒所含化學成分組成根本相同。

關鍵詞:指紋圖譜;續斷飲片;續斷水煎劑;續斷配方顆粒;川續斷皂苷Ⅵ;綠原酸

DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2017.07.019

中圖分類号:R284.1 文獻标識碼:A 文章編号:1005-5304(2017)07-0081-05

Abstract: Objective To establish and compare HPLC fingerprint chromatograms of Dipsaci Radix decoction pieces, aqueous decoction and formula granules. Methods The HPLC analysis was carried out in Wondasil C18 column (4.6 mm × 250 mm, 5 ?m) with a mobile phase of acetonitrile-0.1% phosphoric acid by gradient elution. The flow rate was 1.0 mL/min; the detection wavelength was set at 212 nm; the column temperature was kept at 30 ℃. Results The fingerprint chromatograms from 12 batches of Dipsaci Radix decoction pieces, aqueous decoction and formula granules were established respectively. 14 common peaks in the fingerprint chromatogram in the formula granules could be tracked in the aqueous decoction, and 13 common peaks in the fingerprint chromatogram could be tracked in the decoction pieces. 2 chemical compounds were identified, such as asperosaponin Ⅵ and chlorogenic acid. Conclusion The method of HPLC fingerprint chromatograms is stable and with good repeatability. Dipsaci Radix decoction pieces, aqueous decoction and formula granules are basically the same chemical composition.

Key words: fingerprint chromatogram; Dipsaci Radix decoction pieces; Dipsaci Radix aqueous decoction; Dipsaci Radix formula granules; asperosaponin Ⅵ; chlorogenic acid

續斷為川續斷科植物川續斷Dipsacus asper Wall. ex Henry的枯燥根,《神農本草經》列為上品。續斷性微溫,味苦、辛,歸肝、腎經,具有補肝腎、強筋骨、續折傷、止崩漏成效,用于肝腎缺乏、腰膝酸軟、風濕痹痛、跌仆損害、筋傷骨折、崩漏、胎漏等,是婦科和骨傷科常用中藥,首要含有三萜皂苷、生物堿、

環烯醚萜類、蒸發油類等成分[1-2]。

續斷配方顆粒是以契合編造标準的續斷飲片為質料,經現代提取、濃縮、枯燥、制粒等制劑工藝加工而成。配方顆粒突破了傳統中藥飲片煎煮的運用方式,具有免煎易服、效果敏捷、成分徹底、安全衛生、攜帶方便等長處,可成為代替傳統中藥飲片在臨床上運用的新劑型,并越來越被廣闊患者所承受[3-4]。因為續斷在傳統丹方中多以湯劑入藥,因而,有必要對續斷飲片、水煎劑、配方顆粒三者之間化學成分組成進行比較。現在僅見關于續斷藥材及飲片的質量操控辦法報導,以及對2個廠家配方顆粒中川續斷皂苷Ⅵ含量進行比較的研讨[5-8]。本實驗選用HPLC别離樹立續斷飲片、水煎劑和配方顆粒的指紋圖譜,并對三者HPLC指紋圖譜進行比較研讨,為續斷配方顆粒的質量操控及臨床運用研讨供給參閱。

1 儀器與試藥

Ultimate 3000高效液相色譜儀(低壓三元梯度泵,自動進樣器,DAD檢測器),美國賽默飛公司;變色龍色譜工作站,美國賽默飛公司;Wondasil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 ?m),日本島津;TB-215D電子天平(十萬分之一),德國賽多利斯。

川續斷皂苷Ⅵ對照品(批号111685-201305,純度91.3%),我國食品藥品檢定研讨院;綠原酸對照品(批号20121117,純度≥98.0%),上海源葉生物科技有限公司。12批續斷配方顆粒(9批中試小樣,編号01~09;3批中試制品,批号别離為15012711、15010411、15020811),威風藥業集團有限公司;12批續斷飲片(S1~S10,四川;S11、S12,雲南),經河北省藥品查驗研讨院孫寶惠鑒定為川續斷科植物川續斷Dipsacus asper Wall. ex Henry的枯燥根;12批續斷水煎劑(K1~K10,四川;K11、K12,雲南),嚴厲依照《醫療機構中藥煎藥室辦理标準》藥材煎煮辦法相關要求制備。乙腈為色譜純,水為超純水,其他試劑均為剖析純。

2 辦法與成果

2.1 色譜條件

Wondasil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 ?m),活動相為乙腈(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗脫(0~5 min,10%~13%A;5~15 min,13%~20% A;15~30 min,20%~25%A;30~38 min,25%~45%A;38~45 min,45%~85%A),流速1.0 mL/min,檢測波長212 nm,柱溫30 ℃,進樣量10 ?L。

2.2 對照品溶液制備

精細稱取川續斷皂苷Ⅵ 5.15 mg、綠原酸5.50 mg别離置5 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得川續斷皂苷Ⅵ、綠原酸對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

取12批續斷配方顆粒适量,研細,取約0.1 g,精細稱定,置具塞錐形瓶中,加甲醇25 mL,稱定質量,超聲提取(功率250 W,頻率35 kHz)10 min,放冷,再稱定質量,用甲醇補足減失的質量,搖勻,過濾,取續濾液,即得續斷配方顆粒供試品溶液;取12批續斷飲片,破壞,過4号篩,各取約1.0 g,精細稱定,置具塞錐形瓶中,按配方顆粒供試品溶液制備辦法制備續斷飲片供試品溶液;稱取上述12批續斷飲片各10 g,加水浸過藥面2~5 cm,浸泡30 min,煎煮,堅持微沸60 min,倒出煎液,藥渣加水再煎煮40 min,兼并2次煎液,過濾,真空減壓濃縮至浸膏,真空枯燥,得幹浸膏,按配方顆粒供試品溶液制備辦法制備得續斷水煎劑供試品溶液。

2.4 辦法學調查

2.4.1 精細度實驗 精細稱取同一批配方顆粒樣品(批号15012711)約0.1 g,按“2.3”項下辦法制備供試品溶液,接連測定6次。以14号峰為參照峰,核算各共有峰的相對保存時刻和相對峰面積,成果RSD均小于3%,标明儀器精細度傑出。

2.4.2 安穩性實驗 取同一供試品溶液,别離于制備後0、2、4、8、12、18 h注入液相色譜儀,以14号峰為參照峰,核算各共有峰的相對保存時刻和相對峰面積,成果RSD均小于3%,标明供試品溶液在18 h内安穩。

2.4.3 重複性實驗 精細稱取同一批配方顆粒樣品(批号15012711)各約0.1 g,按“2.3”項下辦法平行制備6份供試品溶液,進樣剖析,以14号峰為參照峰,核算各共有峰的相對保存時刻和相對峰面積,成果RSD均小于3%,标明該辦法重複性傑出。

2.5 續斷飲片、水煎劑、配方顆粒指紋圖譜的樹立

按“2.3”項下辦法别離制備12批續斷飲片、水煎劑、配方顆粒的供試品溶液,按“2.1”項下色譜條件進樣測定,選用國家藥典委員會《中藥色譜指紋圖譜類似度點評體系(2012版)》軟件,别離對12批續斷飲片、水煎劑、配方顆粒色譜圖進行匹配,得到指紋圖譜(見圖1~圖3)。其間,14個色譜峰為12批續斷配方顆粒所共有,經過與對照品色譜圖對照,指認出5号峰和14号峰别離為綠原酸和川續斷皂苷Ⅵ。因14号峰在續斷飲片、水煎劑、配方顆粒中别離度均較好且含量高、安穩,故挑選該峰為參照峰(S),見圖4。

2.6 類似度點評與比較研讨

對續斷飲片、水煎劑、配方顆粒HPLC對照指紋圖譜進行比較,見圖5。一起,選用《中藥色譜指紋圖譜類似度點評體系(2012版)》軟件,比較各12批續斷飲片、水煎劑、配方顆粒圖譜的類似度,成果見表1~表3。成果不同批續斷飲片、水煎劑、配方顆粒之間類似度較高,均在0.9以上。續斷飲片、水煎劑、配方顆粒HPLC指紋圖譜的首要色譜峰根本共同,闡明三者所含化學成分組成根本相同。

3 評論

本實驗以乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸、甲醇-水作為活動相進行了梯度洗脫,成果顯現,以甲醇-水為活動相梯度洗脫基線不穩,以乙腈-水為活動相梯度洗脫色譜峰别離度不高、峰形較差,而以乙腈-0.1%磷酸作為活動相進行梯度洗脫所得色譜峰的基線平穩、别離度傑出而且峰形對稱,故挑選乙腈-0.1%磷酸作為活動相進行梯度洗脫。

供試品溶液制備時,本實驗對提取溶劑(50%甲醇、70%甲醇、甲醇)、超聲時刻(10、20、30 min)等進行了研讨,經過調查别離度、色譜峰形、出峰數目及各首要共有峰面積巨細,終究斷定了以甲醇超聲10 min作為供試品溶液的制備辦法。

本實驗選用DAD檢測器對續斷配方顆粒供試品溶液進行紫外全波長掃描,成果顯現,波長在212 nm與220 nm處大多數色譜峰具有較大吸收且色譜峰數量較多,而212 nm為參照峰川續斷皂苷Ⅵ的最大吸收波長,故挑選212 nm作為檢測波長。

本實驗選用HPLC對12批續斷飲片、水煎劑、配方顆粒指紋圖譜進行了比較研讨,在辦法學調查中,精細度、安穩性、重複性項下各共有峰的相對保存時刻和相對峰面積的RSD均小于3%,标明此辦法精确、牢靠、重複性傑出。比較續斷飲片、水煎劑、配方顆粒HPLC指紋圖譜發現,在續斷飲片中未發現3号色譜峰,但是此成分在續斷水煎劑和配方顆粒中均存在,可能是續斷飲片經一系列制劑工藝(如高溫提取、濃縮等)後發生的,該成分是在制劑過程中其他成分受熱相互效果發生仍是由其他成分轉化,有待進一步研讨。别的,本實驗與已宣布的續斷藥材指紋圖譜文獻[9-10]比較,具有辦法簡潔、剖析時刻較快、别離度傑出、色譜峰明晰及峰形對稱等長處,更能精确反映出續斷飲片與水煎劑、配方顆粒之間化學組成的異同,為續斷配方顆粒的臨床運用研讨供給參閱。

參閱文獻:

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[M].北京:我國醫藥科技出版社,2015:329-330.

[2] 劉永,衛瑩芳,朱俊平,等.續斷HPLC指紋圖譜研讨[J].中藥材,2010, 33(3):359-361.

[3] 孟凡辰,郭兆安.中藥配方顆粒與傳統中藥湯劑的比照[J].我國醫藥科學,2015,5(3):89-90,105.

[4] 宋紅梅.中藥配方顆粒運用遠景點評[J].我國現代藥物運用,2015, 9(20):269-270.

[5] 譚洪根,林生,張啟偉,等.高效液相色譜法測定續斷藥材中川續斷皂苷Ⅵ的含量[J].我國中藥雜志,2006,31(9):726-727,739.

[6] 李敬芝,張春鳳,楊中林.HPLC法測定續斷藥材中常春藤皂苷元的含量[J].中醫藥學報,2011,39(6):62-64.

[7] 楊紫剛,丁鲲,許剛,等.續斷化學成分研讨[J].中藥材,2012,35(11):1789-1792.

[8] 章懷奮,方既明,閻紅,等.續斷配方顆粒中川續斷皂苷Ⅵ含量比較[J].我國藥師,2012,15(8):1205-1206.

[9] 劉二偉,吳帥,王家龍.川續斷HPLC指紋圖譜研讨[J].藥物點評研讨, 2010,33(6):432-435.

[10] 曹越,彭維,蘇薇薇,等.續斷藥材指紋圖譜的研讨[J].中藥新藥與臨床藥理,2010,21(1):50-54.

(收稿日期:2016-11-08)

(修回日期:2016-11-29;修改:陳靜)